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1/8スケール　シーケンス反応

Yagi Y.: 2015.04.07

BigDye v.3.1を使用。遺伝子実験施設のシーケンス解析サービスで600-700bp以上読めています。
ネット上にはより薄めた反応例が紹介されているのが見つかります。
サンプル数が多い場合はより薄めた反応系を試して、さらなるコストダウンに努めましょう。
プライマーは、濃度によって溶液量が異なります。5pmol程度あれば十分なようです。水の量で調整します。

溶液の調整

DNA sol. + H₂O            14.5

5x duluent                      3.5

primer                             1

サイクルシーケンシング反応

PCR machine setting
Cycle

96℃ 1min

96℃ 30sec/ 50℃ 15sec/ 60℃ 4min x30

add

H₂O                   14.5μL

3M NaoAc         3

Et-OH                62.5

RT15min

Cfg 20min

Wash 70% Et-OH 250μL

Dry

Add

20μL Hi-Di formamide

vortex and spin down

<95℃ 2min - on ice>