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Materials for Western blot and CBB

yamasaki.y: 2003.10.02

Transfer buffer

1. 12 g of Tris, 14.4 g of glycine
2. 適当量 of H2O
3. 50 ml of MeOH
4. mes up to 1 L (1 L medium botle)

TBST

1. 30 ml of 2M Tris-HCl (pH7.4), 92.3 ml of 5M NaCl, 15 ml of 10% Tween 20
2. mes up to 3 L (3 L 試薬瓶)

CBB staining solution

• [100 ml] 0.2 g of CBB R250, 50 ml of MeOH, 40 ml of H20, 10 ml of Acetic acid.

CBB de-staining solution

• [250 ml] 75 ml of MeOH, 150 ml of H20, 25 ml of Acetic acid.

CBB pre-fix solution

• [25 ml] 5 ml of MeOH, 1.875 ml of Acetic acid, up to 25 ml with H2O. (50 ml FALCON に直前に作る)

30% Acrylamide soln.

発ガン性につき取り扱い注意

組成

• 29 % Acrylamide (58 g / 200 ml)
• 0.8 % Bis-acrylamide (2 g / 200 ml)

Recipe

1. Acrylamide と Bis-acrylamide を計量
2. H2O で 200 ml にメスアップ
3. メディウム瓶に移し、アルミホイル等で遮光、4'C で保存

10% APS soln.

Recipe

1. APS を計量。過硫酸アンモニウム (1 g / 10 ml)
2. 15 ml FALCON に移し、H2O で 10 ml にメスアップ
3. Microtube に分注、-20'C で保存

3x Sample buffer (10 ml)

組成

• 30 % Glycerol
• 195 mM Tris-HCl (pH 6.8)
• 15 % 2-mercaptoethanol
• 9 % SDS
• BPB 適量

Recipe

1. 15 ml FALCON を用意
2. 3 ml of Glycerol
3. 3.9 ml of Tris-HCl (pH 6.8)
4. 1.5 ml of 2-mercaptoethanol
5. mix
6. 0.9 g of SDS
7. mix、溶けにくければあたためる
8. saturated BPB soln. でメスアップ
9. Microtube に分注して -20'C で保存